终点PCR中的顶配—热启动PCR

发布者:艾美捷科技发布时间:2020-06-04

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      夏天,最怕听到“热”这个字!有没有人跟小编一样,一听,就热?

 

 

      所幸,最近一节段还是炎夏来临前的雨季,全国范围内还是比较凉爽的,对于怕热的人生,再来一块清凉的“冰心”,才最爽!

 

凉爽

 

      可见温度对生活的影响有多大,炎炎夏日,空调开高一度和低一度,有时候后就是天(da)差(han)地(lin)别(li).

 

      对于温度异常敏感的PCR实验,更是如此!

 

      每次PCR实验都要到处找冰盒,铲冰…… 各种怕温度敏感的酶在小小的PCR小管里发生不该发生的story,比如非特异扩增,悄悄地合成引物二聚体等,最后P出来各种条带,天津快三官网就要cry了。

 

       那么,如果天津快三官网使用了热启动DNA聚合酶,故事就不一样了。经过化学修饰的TaqDNA聚合酶,对温度“炒鸡”稳定,PCR加样再也不需要到处找冰盒铲冰,小心翼翼的忐忑了。HoT FIREPol®热启动DNA酶常温稳定一个月,只有温度达到95℃才会被激活。所以天津快三官网再也不必担心加样的过程以及升温之前,PCR就开始反应,合成不需要的片段。做到随意PCR 如吃瓜!

 

PCR反应

 

      好啦,言归正传,吃瓜的同时,天津快三官网来点专业解释:

      在传统的PCR反应中,反应体系各成分(Taq DNA聚合酶、dNTP 和引物等)均是一次加入并进入循环,在反应温度由室温(25℃)上升至高温(94~95℃)过程中,可能发生引物错配和二聚体的形成。引物与模板中一些非靶位点的错配和引物之间形成的二聚体,在Taq酶的作用下均可延伸,这些非特异性产物又可以在后面的PCR循环中继续扩增,使非特异性产物不断积累,同时,也消耗反应体系的各成分,最终PCR扩增的特异性产物大大减少。热启动PCR(hot start PCR)是指DNA聚合酶只有在样品温度至少超过70℃时才发挥作用的PCR。通过这种方式控制PCR反应的必须组分DNA聚合酶,直到反应混合物被加热到可以阻止非特异引导和引物聚合的温度后,再启动PCR达到有效扩增特异性PCR产物的目的。

 

      热启动PCR循环是这样的,为了充分激活酶,比普通PCR增加了热激活步骤。

 

 

循环步骤 温度 时间 循环
起始热激活 95℃ 12-15min 1
变性 95℃ 15-30s 26-35
退货 50-68℃ 30-60s
延伸 72℃ 1-4min
终末延伸 72℃ 5-10miin 1

 

      PCR的灵魂—热启动DNA聚合酶

 

      与TaqDNA酶不同,热启动DNA聚合酶是经过化学修饰的Taq酶,常温操作时其没有活性,只有高温才能激活酶,可以避免低温或者常温操作时非特异性扩增以及引物二聚体的产生。这款Solis 热启动 FIREPol DNA 聚合酶更灵敏,特异性更强,可以常温操作,常温稳定1个月。同时,PCR产物可以无忧做下游实验DHPLC和TA克隆。

 

热启动PCR-第一款

热启动DNA聚合酶组合套装(货号# 01-02-xxxxx)

 

      给你最大自由度的一款PCR组合,它的组分有:

 

      1.热启动DNA 聚合酶

      2.反应buffer1---10x 反应液B1(不含Mg2+和去污剂)

      3.反应buffer2---10x 反应液B2 (不含Mg2+)

      4.25 mM MgCl2

      5.10x Solution S

 

      细心的同学已经发现,为什么一般的PCR体系只有一个buffer,而这个却有两个?

 

      小编为你解密啦!之所以包含两款Buffer 是为广大用户考虑的,如果你的样本不需要去污剂,或者需要自由调整Mg2+浓度,这款给你最大自由度 ,可以按照您实验需求调整方案。而这款套装的最大的宝藏是组分Solution S,常规PCR不需要它,但是如果你遇到扩增困难的模板,或者高GC含量模板,10x Solution S 就要登场啦,并且你可以根据需要调整它的工作浓度,1×,2×,3×.

 

      漂亮的数据告诉你它有多好!

 

      数据显示HoT FIREPol®热启动DNA酶可以很好的扩增基因组DNA片段

 

 

扩增人基因组DNA的4个片段:1,2为HoT FIREPol®DNA聚合酶;3,4为竞品A公司;5,6为竞品B公司。

 

      如果您需要热启动PCR预混液,这里有多功能热启动PCR预混液,因为篇幅有限,这里给大家列表展示:

 

基于热启动酶的PCR类型 英文名称 天津快三官网特色 MgCl2 浓度 *扩增片段范围 货号
高GC含量PCR HOT FIREPol®
gC Master MIX
ž 尤其适合>79%GC的DNA模板扩增
ž MgCl2和DMSO单独包装
ž 更灵活设计实验
ž 一管PCR预混液,减少操作步骤,避免加样误差
25 mM MgCl2 5kb 04-33-xxxxx
多重PCR HOT FIREPol® MultiPlex Mix ž 可以同时扩增多个目的片段
ž 一管PCR预混液,减少操作步骤,避免加样误差
10 mM 5kb 04-34-xxxxx
HOT FIREPol® MultiPlex Mix (上样即用型) 10 mM 5kb 04-36-xxxxx
高保真PCR HoT FIREPol® blend master mix ž 精确度优化的PCR,5倍保真度(与Taq酶相比),适合高需求的PCR检测
ž 一管PCR预混液,减少操作,避免加样误差
• 7.5mM
• 10mM
• 12.5mM
• 15mM
5kb 04-27-xxxxx
HOT FIREPol® MultiPlex Mix blend master mix(上样即用型) 5kb 04-25-xxxxx

 

      *扩增片段范围:可以扩增各种类型DNA模板的片段,如cDNA, λDNA,质粒DNA等,扩增片段<5kb; 以及多物种的基因组DNA (人、动物、植物等),扩增片段<3kb .

 

      这些试剂盒有多好,性价比有多高呢? 一组漂亮的数据告诉你:

 

      HOT FIREPol®高GC含量预混液在GC含量高达79%的模板上表现良好!

 

GC含量

 

      扩增多种高GC含量片段

      使用高GC含量PCR预混液从人gDNA扩增出12种高GC的基因。 DNA模板和DMSO的终浓度分别为1 ng /μl和10%。

 

      HOT FIREPol® 多重PCR 预混液进行4、8、14、18多重PCR检测, 表现敏感而特异!

 

HOT FIREPol® 多重PCR 预混液

 

      多重PCR扩增

      人类gDNA的不同基因在使用HOTFIREPol®MultiPlex Mix进行多重反应。扩增了122 bp到1340 bp的DNA片段,显示相似的高产量和高特异性,同时进行了4、8、14和18多重PCR检测。

 

      HOT FIREPol®高保真PCR可以高度特异而准确的扩增多种长度DNA片段

 

HOT FIREPol®高保真PCR

 

    

       当然还有优秀的参考文献:

 

       Pellerin J.l., et al., Theriogenology (2019)

       Ogola E. O., et al. Parasites and Vectors (2019)

       Bahram, M., et al. Nature (2018).

       Otsing, E., et al. Soil Biology and Biochemistry (2018).

       Mullett, M.S., et al. Forest Pathology (2018).

       Strobel, a., et al. Environmental Toxicology and Chemistry (2018).

       lange, M.K., et al. Veterinary Parasitology (2018).

 

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