还在为高GC含量PCR犯愁吗?看这里

发布者:艾美捷科技发布时间:2020-05-26

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      每天做实验小心翼翼,时时担心提取的DNA被污染、被降解。终于,废了九牛二虎之力,好不容易提取到高质量的DNA,然而PCR仍然P不出来条带。是试剂加漏了吗?是酶失活了吗?换上新试剂,冰上重来一次,然并卵,不仅P不出来,更重要的是也不知道为啥P不出来,贝多芬都弹不出我的悲伤!

 

       算了,悲伤往事不再提,今天小编就总结教训,带你啃一啃PCR的这个硬骨头吧!PCR扩增不出来条带的原因有很多,诸如引物设计有误,DNA模板已降解,酶失活或者有杂酶污染,缓冲液条件不当,模板DNA的GC含量太高等等。大部分原因可以通过换试剂得到解决,但是对于高GC含量的样本,往往束手无策。

 

高GC含量样本

 

      在DNA(A、T、C、G)4种碱基中,鸟嘌呤(G)和胞嘧啶(C)所占的比率称为GC含量。因为G、C之间形成三对氢键,解链所需能量较高,所以模板很难打开,高GC含量(G+C≥60%)模板扩增中所面临的主要困难是模板中容易形成稳定的二级结构妨碍DNA聚合酶在模板上的推进,而且模板上可能存在多个非特异性的引物复性位点,导致非特异性扩增,甚至很多时候扩增不出靶基因。高GC含量的DNA序列广泛存在于不同物种的基因组中。人类高GC含量的DNA序列虽然只占了全基因组的3%,但有28%的基因位于这些区域内。此外,包括启动子和增强子在内的许多基因重要调控区域也大都由高GC含量的DNA序列组成。

 

      目前,研究学者建立了各种不同的方法来解决高GC含量DNA模板扩增困难的问题,包括降落PCR、添加增强剂(如DMSO)等。虽然这些方法和手段的单独使用都获得了一定的效果,但是对于引物和模板的要求普遍过于苛刻,适用范围也比较局限,并不具有普遍适用性,而且往往经过多次摸索和尝试,也不易得到较好的结果。

 

pcr原理示意图

 

      所以您还在为高GC含量PCR烦恼吗?您还在为扩增不出来结果而焦心吗?PCR试剂领军品牌Solis BioDyne可以为您轻松解决这个难题,可同时提供适合高GC含量PCR的预混液以及添加剂:

 

货号 名称 规格 特点
04-33-00115 5x HOT FIREPol GC Master Mix
高GC含量模板预混液
250rnx 适用于GC含量高至79%的模板;长度可扩增至5kb;非常稳定,可常温运输和操作
04-33-02015 5000rnx
05-16-00010 10x GC-rich Enhancer
高GC含量增强剂
1ml 高GC含量模板PCR的添加剂
05-16-00050 5ml

 

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