人源血清学检测二抗怎么选?

发布者:艾美捷科技发布时间:2020-06-03

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       血清学检测是许多健康问题诊断过程中的关键检测方法,包括器官移植筛查,交叉匹配,疾病诊断,监测等。这些检测在临床决策中起着至关重要的作用,免疫分析是目前可用的最强大,最灵敏的血清学检测方法之一,它基于抗原抗体之间的高度特异性结合,即使在低浓度下也能进行定性和定量检测。有多种免疫测定方法,以下是其中最常见两种检测方法示意图,分别是夹心法(图1A)和直接法(图1B),当选择用于夹心法检测的抗人二抗时(图1A),需要考虑一抗的种属,并使用与该物种有最小交叉反应的二抗。

 

血清学检测

 

图1:测定方式:A.夹心法,B.直接法

 

      免疫分析多种疾病诊断起重要作用

 

     各类免疫测定技术各有优缺点,例如,快速测定法(如胶体金侧向流动法)可在数min 内提供定性结果,可进行即时检测,而ELISA可能需要花费数小时才能完成,但可提供定量数据。

 

快速免疫测定法

 

      而当前严重急性呼吸系统综合症冠状病毒2(SARS-CoV-2)大流行更加凸显了侧向流动分析的优势,由于该疾病具有快速传播和较高的死亡率等特征,美国FDA已采取相关措施,允许各州未经FDA批准就可开展新的SARS-CoV-2检测。该修订允许使用快速检测试剂盒,该试剂盒定性检测患者针对SARS-CoV-2产生的IgG和IgM抗体,从而显著加大了SARS-CoV-2的检测能力,尽可能地减少病毒的传播。尽管侧向流动检测具有明显的优势,但这种分析方法无法提供定量的数据。

 

SARS-CoV-2检测

 

表1.几种类型的免疫测定法的优缺点检测过程,检测Ig类

 

免疫测定方法 检测过程 可检测免疫球蛋白
快速测试/横向流动(胶体金) 胶体金层析试纸条主要由4个部分组成:在样品区滴加样品后,借助毛细作用,样品泳动至玻璃纤维膜,金标复合物溶解,并与样品进行抗原抗体反应,形成复合物,继续泳动至硝酸纤维素膜的检测区,带有金标记的复合物被检测区抗原或抗体捕获,呈现条带。而质控线不管有无目的样本,都会与金标抗体进行结合并显色,相当于天津快三官网的阳性对照,证明金标抗体是正常的。 IgG,IgM
流式细胞 将血清样品添加到带有抗原的细胞或磁珠中,样本中的人源抗体会捕获抗原,再加入荧光探针偶联的二抗(图1B),然后可以通过流式细胞仪分析荧光以给出定量数据。 IgG,IgM,IgA
流动注射分析(FIA) 与流式细胞术相似,将样品注射到含有固定抗原的柱子中,样品中的人源抗体会与抗原结合(图1B),再加入荧光探针或酶偶联抗人的二抗进行检测,用比色或荧光法进行检测。 IgG,IgM,IgA
ELISA法 将一抗固定在固体介质表面上,通常是微孔板,随后会捕获抗原(图1A)或将抗原直接包被在板上(图1B),与来自血清的人源抗体结合,加入酶标记的抗人二抗,最后,添加酶底物,从而得到与分析物浓度成正比的比色读数。 IgG,IgM,IgA
聚合酶链反应(PCR) 该过程类似于ELISA,但是第二抗体是与寡核苷酸缀合。然后通过实时PCR进行DNA扩增和检测。 IgG,IgM,IgA

 

      抗人二抗是各类免疫分析中的关键试剂


抗人的二抗是各类免疫分析中的关键试剂

 

      尽管免疫测定的功能和目的有所不同,但为了在临床上获得准确,可靠数据,开发血清学试剂盒时,高质量试剂至关重要。抗人二抗的质量是开发免疫测定试剂盒时的关键考虑因素,二抗需要谨慎选择,因为它们会结合一种一抗的多个表位上,从而增强了信号的灵敏度和选择性。表2总结了在进行免疫测定选择合适的二抗时需要考虑的多个方面。

 

      表2.在免疫分析中选择合适的二抗时的考虑因素以及天津快三官网抗体的特征

 


考虑因素 Jackson 二抗
抗体来源 人体样品的血清学检测应使用抗人二抗,以最大程度地减少非特异性结合,以最大程度降低背景信号和假阳性。 天津快三官网可以提供多种来源的抗人二抗,包括羊驼,驴,山羊,小鼠和兔子。
天津快三官网类别
(完整的IgG还是片段)
二抗可以是完整的免疫球蛋白(Ig)G,也可以是F(ab')2和Fab片段,完整的IgG分子可适用于大多数检测,而F(ab')2和Fab片段可用于避免与具有Fc受体的活细胞的非特异性结合。 天津快三官网可以提供完整IgG形式的二抗以及F(ab')2和Fab片段
特异性 根据所需免疫测定的特异性,可以制备针对整个Ig分子的二抗,以及针对于Fc或F(ab')2结构域特异性的二抗。 天津快三官网可以提供针对于对整个人源Ig分子的二抗,以及针对于Fc和F(ab')2结构域特异性的二抗。
亚型 大多数免疫测定均只检测IgG型抗体,这种类型抗体占总血清Ig的〜75%,是次级免疫反应的一部分。但是,血清中同时也存在IgM和IgA,而且二抗只对同亚型一抗的具有特异性。 天津快三官网可以提供对IgG,IgM,IgA,IgG+IgM和IgG+IgM+IgA一种或几种亚型有特异性的二抗。
亲和纯化和交叉吸附 由于在Ig结构域具有高度的结构保守性,建议对抗体进行亲和纯化并进行交叉血清吸附的,以减少交叉反应的可能性。 免疫亲和层析可用于分离亲和纯化的抗体。天津快三官网可以选择已进行物种交叉吸附的抗体,交叉吸附相关信息会在对应天津快三官网说明括号中提供,表示为“ min X”,“X”为相关物种的缩写。
偶联标记 二抗通常与分子偶联,例如酶,荧光探针或有色颗粒。免疫测定的检测系统将确定标记物的种类。 抗人二抗可以与多种标记物偶联,包括生物素,AP,HRP,荧光基团和胶体金纳米颗粒。

 

      抗人二抗天津快三官网推荐:

 

抗体名称 标记 货号
山羊抗人IgG(H + L)(min X Bov, Hrs, Ms Sr Prot) 无标记 109-005-088
HRP 109-035-088
生物素 109-065-088
山羊抗人类IgG,Fcγ片段特异性 无标记 109-005-008
HRP 109-035-008
生物素 109-065-008
山羊抗人类IgG,Fcγ片段特异性(min X Bov,Sr Prot) 无标记 109-005-190
HRP 109-035-190
生物素 109-065-190
山羊抗人类IgG,Fcγ片段特异性(min X Bov,Hrs,Ms Sr Prot) 无标记 109-005-098
HRP 109-035-098
生物素 109-065-098
聚乙烯 109-115-098
山羊抗人类IgG + IgM(H + L)(min X Bov Sr Prot) 无标记 109-005-127
HRP 109-035-127
生物素 109-065-127
山羊抗人类IgM,Fc5μ片段特异性(min X Bov Sr Prot) 无标记 109-005-129
HRP 109-035-129
生物素 109-065-129
F(ab')2山羊抗人IgG片段,Fcγ片段特异性(min X Bov,Hrs,Ms Sr Prot) 无标记 109-006-098
F(ab')2山羊抗人IgG片段,Fcγ片段特异性(min X Bov,Hrs,Ms Sr Prot) 无标记 109-006-098
HRP 109-036-098
生物素 109-066-098
聚乙烯 109-116-098
F(ab')2山羊抗人IgG片段,Fcγ片段特异性(min X Bov, Ms, Rb Sr Prot) 无标记 109-006-098
HRP 109-036-098
生物素 109-066-098
聚乙烯 109-116-098
驴抗人IgG,Fcγ片段特异性(min X Bov, Hrs, Ms Sr Prot) 无标记 709-005-098
HRP 709-035-098
生物素 709-065-098
驴抗人IgM,Fc5μ片段特异性(min X Bov, Hrs Sr Prot) 无标记 709-005-073
HRP 709-035-073
生物素 709-065-073

 

      Note:Bov:牛;Hrs:马;Ms:小鼠;Rb:兔子;Sr Prot:血清蛋白

 

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